無(wú)菌 藥品在使用前的無(wú)菌保證,是藥品管理法規的要求。因此,必須有容器完整性(Container Closure Integrity-CCI)的驗證和監測,以確保在無(wú)菌藥品生產(chǎn),質(zhì)控,運輸和儲存,乃至產(chǎn)品有效期的整個(gè)生命周期過(guò)程中,產(chǎn)品不受微生物的污染,確保病人用藥安全。目前各個(gè)國家的藥政法規,都有提供容器完整性CCI的測試方法,但是沒(méi)有提供具體細節,指導如何合理的選擇方法,及評價(jià)一個(gè)無(wú)菌藥品包裝系統( Container Closure System-CCS)的完整性。方法的合理選擇,以及科學(xué)的制定一個(gè)可接受的標準,和產(chǎn)品的性質(zhì)和包裝系統密不可分。歐洲醫藥同盟多次開(kāi)會(huì )探討容器完整性測試的最佳方法,卻得出結論,并不存在容器完整性測試的一個(gè)黃金標準,在考慮無(wú)菌制劑的既定用途和產(chǎn)品設計的基礎上,需要采取一個(gè)靈活的方法,來(lái)評估產(chǎn)品的包裝容器完整性。
美國藥典修訂了容器完整性測試(Container Closure Integrity Testing-CCIT)的通則方法USP<1207>。這個(gè)修訂緣于上世紀70年代的一個(gè)醫療事故,當時(shí)美國雅培工廠(chǎng)的一個(gè)靜脈輸注產(chǎn)品的包裝系統做了更換,在醫院注射此產(chǎn)品的病人廣泛爆發(fā)敗血癥,導致10%的病人因此死亡,經(jīng)調查證實(shí)更換的包裝系統存在密封完整性的缺陷,使產(chǎn)品遭受微生物污染。這個(gè)悲劇事件,以及不斷提升的藥政監管要求,強調了制藥企業(yè)確保無(wú)菌制劑包裝完整性的重要性。
方法簡(jiǎn)介和選擇依據
根據USP通則<1207>,將容器密封完整性測試的檢測方法分成確定性和概率性?xún)煞N類(lèi)型。確定性檢測方法包括:高壓泄漏檢測法,激光頂空分析,氦氣泄漏測試,質(zhì)子流法,壓力衰減法,真空衰減法,和Corona電極放電法。概率性檢測方法包括:氣泡發(fā)射法,色水法,和微生物挑戰法。
每個(gè)方法有其不同的靈敏度以及選擇參考點(diǎn)。制藥企業(yè)需要把包裝系統CCS作為藥品開(kāi)發(fā)的關(guān)鍵質(zhì)量屬性之一,用質(zhì)量源于設計(Quality by Design-QbD)的理念,在藥品設計到生產(chǎn)的整個(gè)生命周期內,基于不同階段藥品有不同的應用目的,選擇合適的、CCIT方法。在選擇CCIT方法的時(shí)候,必須充分理解內包裝的材料特點(diǎn),制作工藝參數,和操作中的控制方法。此外,對于容器密封性的可接受標準,在不同的產(chǎn)品發(fā)展階段也會(huì )有所不同。
在選擇一個(gè)合適的容器完整性測試CCIT方法的時(shí)候,需要考慮以下因素:
- 方法的既定用途,即,用于包裝系統的開(kāi)發(fā)和確認,還是商業(yè)生產(chǎn)階段的過(guò)程控制或驗證,還是穩定性測試;
- 包裝系統開(kāi)發(fā)前的認知,即,是開(kāi)發(fā)該產(chǎn)品和包裝系統,還是改進(jìn)一個(gè)新產(chǎn)品的包裝系統;
- 包裝系統的形式,即,小玻璃瓶,注射器,藥品和醫療器械的復合制劑,還是靜脈點(diǎn)滴用袋子;
- 包裝系統的材料,是延展性材料,玻璃,還是高分子聚合物;
- 藥品的類(lèi)別,即,液體制劑,凍干粉制劑,小分子產(chǎn)品,還是大分子產(chǎn)品,水相制劑,溶劑制劑,還是油相制劑,產(chǎn)品導電性如何,產(chǎn)品黏度,頂空氣體的組成,常壓,還是真空包裝,或是過(guò)壓包裝;
- 測試時(shí)間長(cháng)短的考量;
- 要求的方法靈敏度;
- 樣本做人工泄漏的可行性和人工泄漏方式
- 用于專(zhuān)屬研究的樣本量;
- 樣本制備的考量,以及樣本制備帶來(lái)的潛在風(fēng)險,比如需要移除標簽,或需要排空小瓶,或需要清潔小瓶。
在很多情況下,包裝密封性測試方法的最初選擇,是基于某特定測試技術(shù)的經(jīng)驗。隨著(zhù)制藥企業(yè)經(jīng)驗的積累,類(lèi)似產(chǎn)品或包裝的參考,還有文獻的參考,以及行業(yè)標準和指南文件的指導,在產(chǎn)品開(kāi)發(fā)到發(fā)展的整個(gè)生命周期,會(huì )采用不同的測試方法。在測試方法選擇上,還需要考慮以下因素:
?對測試樣本的破壞性還是非破壞性;
?測試的方法是內聯(lián),在線(xiàn),離線(xiàn),還是近線(xiàn);
?測試的有效性考量,包括測試速度(比如單位時(shí)間內的測試量),測試的產(chǎn)出(包括樣本平衡的時(shí)間和控制組的測量)
? 測試頻率和計劃:只需要測試一次還是需要多次,比如需要在穩定性方案中測試(氣體滲透的潛在影響);
?測試成本,包括設備的購買(mǎi),方法和設備的驗證,測試條件的維護成本;
?用于測試裝載的包裝系統,還是空載的包裝系統
?是否干擾藥品的理化測試;
?方法操作的特點(diǎn):靈敏度,方法的耐用性,精密度,和準確度;
?測試結果的表述方式:通過(guò)/失?。?,判定是否存在超過(guò)方法靈敏度的泄漏),泄漏位置的標記,還是能定量的測出泄漏孔的大小或泄漏流量;
? 泄漏樣品帶來(lái)的設備污染風(fēng)險。
不管選擇哪個(gè)測試方法,測試儀器都需要經(jīng)過(guò)校驗,測試方法也需要通過(guò)驗證,測試方法的系統適用性試驗,應該包括陽(yáng)性控制(即已知泄漏的樣本)和陰性控制(即沒(méi)有人工泄漏的樣本)。
方法特點(diǎn)和應用范圍
下文將對各種常見(jiàn)測試方法的優(yōu)缺點(diǎn)和應用范圍做詳細探討。
1)高壓泄漏檢測法
High-voltage leak detection
這是一種確定性的泄漏測試方法。高壓電檢漏是基于定量的電導測試,要求容器內灌裝的液體有一定的電導率,在待檢品上外加高壓電,泄漏點(diǎn)的存在導致樣品電阻的下降,從而導致電流的突躍,當然這個(gè)電流應該大于預先確認的方法檢測閾值(通過(guò)/失敗判定的靈敏度)。
該方法的優(yōu)點(diǎn):
- 不需要破壞樣本
- 可以做到100%的在線(xiàn)測試
- 高速的測試
- 不需要測試前的樣品制備
- 其準確性獨立于員工的操作技能
- 在常壓下測試
該方法的缺點(diǎn):
- 只有通過(guò)/失敗兩種結果,沒(méi)有定量的結果
- 藥品本身的電導應該大于包裝材料的電導
- 有可能破壞到產(chǎn)品(比如引起蛋白質(zhì)的降解)
- 制劑液體必須不是易燃液體
- 測試過(guò)程會(huì )產(chǎn)生臭氧
- 對于特定的包裝系統,需要的固定裝置
- 電極必須離泄漏點(diǎn)在一定的距離內
- 藥品液體需要和泄漏點(diǎn)接觸或者非??拷?/p>
- 產(chǎn)品堵塞泄漏孔會(huì )導致測試結果不準確
- 不適用于凍干粉制劑產(chǎn)品
該方法的應用范圍和建議:
- 對于商業(yè)化生產(chǎn)線(xiàn)的高產(chǎn)出的檢測。
- 需要評估產(chǎn)品接觸到高壓后的質(zhì)量影響。
- 在長(cháng)期穩定性樣品的泄漏測試上受限,這主要是由于長(cháng)期儲存過(guò)程中液體風(fēng)干堵塞泄漏孔。
- 產(chǎn)品的電導可能不足以檢測出泄漏
- 可以把100%的在線(xiàn)檢測模式整合到自動(dòng)目測檢查的生產(chǎn)線(xiàn)中。
- 在100%的在線(xiàn)測試中依舊受到限制,這主要是由于方法有其靈敏度,只能測試到大于靈敏度的泄漏。
- 當泄漏點(diǎn)在小瓶的頂端位置,比如在閘蓋處,沒(méi)有和液體產(chǎn)品接觸到,該方法就不適用。
2)激光頂空分析
Laser-based headspace analysis
這是一種確定性的泄漏測試方法。激光法是通過(guò)監測容器頂空壓力、水汽和頂空氧變化來(lái)判定容器的完整性,原理是發(fā)射的激光穿透容器頂空,容器頂空的水汽和氧對激光有吸收,激光吸收量和對應的物質(zhì)含量成正比。頂空水汽的吸收峰寬度和頂空壓力成正比,因此可以通過(guò)頂空水汽的吸收峰寬來(lái)獲得頂空壓力。
該方法的優(yōu)點(diǎn):
- 不需要破壞樣本
- 可以做到定量測試
- 可以做到100%的在線(xiàn)測試
- 高速率的測試
該方法的缺點(diǎn):
- 包裝容器必須是透明的
- 需要在包裝瓶的頂空有可以改變的氣體環(huán)境
- 需要頂空部位有一定的空氣體積供于檢測
- 在探測小尺寸的泄漏上,會(huì )延長(cháng)測試的時(shí)間
- 變更設備的部件時(shí)需要包含所有不同的尺寸和型號
該方法的應用范圍和建議:
- 對于微米級孔徑大小的泄漏,測試可能需要耗時(shí)幾周的氣體交換。
- 測試方法方便使用
- 可用于評估瞬間發(fā)生的泄漏(比如測試需要低溫儲存的產(chǎn)品)
- 有可能導致錯誤的測試結果,尤其是在穩定性研究中,由于氣體的滲透或被液相吸收。
- 由于快速的和環(huán)境壓力平衡,大尺寸的泄漏可能無(wú)法測出(比如測試低溫儲存的產(chǎn)品)。
- 不容易區別出不同尺寸的泄漏。
- 不容易甚至不能夠測試出在液面下的泄漏,因此,只適用于預灌注注射器。
- 凍干粉制劑產(chǎn)品可能會(huì )導致泄漏的堵塞。
- 有部分的壓力依賴(lài)于溫度。
3)真空衰減法
Vacuum decay
這是一種確定性的泄漏測試方法。真空衰減法是將包裝容器置于專(zhuān)門(mén)的測試腔體內,對測試腔體抽真空,容器內外壓差使得容器內部氣體通過(guò)漏孔泄漏進(jìn)入測試腔體,主機壓力傳感器監測到壓力的變化,將壓力變化值和參考值做比較,壓力增大說(shuō)明存在泄漏,以判定容器密封完整性是否格。此方法的測試步驟包括:抽真空、保壓和測試。
該方法的優(yōu)點(diǎn):
- 不需要破壞樣本
- 可以做到100%的在線(xiàn)測試
- 高速率的測試和產(chǎn)出
- 測試不會(huì )影響生產(chǎn)進(jìn)度
- 有ASTM方法可供參考(ASTM-American Society for Testing and Materials)
- 可適用于液體和凍干粉的制劑
- 可應用于有色包裝瓶和貼好標簽的包裝瓶檢漏
該方法的缺點(diǎn):
- 儀器昂貴,每種包裝系統需要特定的儀器腔體
- 產(chǎn)品堵塞泄漏孔的情況下會(huì )檢測不出泄漏
- 真空腔體的準備至關(guān)重要(濕度會(huì )影響測試結果)
該方法的應用范圍和建議:
- 此方法適用性很廣,可用于支持產(chǎn)品開(kāi)發(fā),商業(yè)化,以及穩定性研究各階段,包裝容器的密封性檢查。
- 適用于液體和凍干粉的制劑。
- 可應用于包裝器械的測試,和貼好標簽的包裝瓶檢漏。不過(guò),相對于未貼標簽的初級包裝,其檢測靈敏度是降低的。
- 只限于在線(xiàn)測試,并會(huì )產(chǎn)生假陽(yáng)性結果(比如,當有滯留氣體在閘蓋處時(shí);或者受到濕度波動(dòng)的影響時(shí))。
- 方法開(kāi)發(fā)研究表明,該方法對凍干粉,預灌注液體的注射器,和小容量瓶液體制劑具有等同的靈敏度。
- 當應用于液體制劑時(shí)(黏度限制),鐳射穿孔的陽(yáng)性控制樣本容易出現堵塞的情況;對預灌注注射器,細孔也很容易被蛋白質(zhì)或硅油堵塞。
- 壓力變化和泄漏的尺寸,泄漏的速率有量級的相關(guān)性。然而,無(wú)法區分泄漏是來(lái)自于多個(gè)泄漏小孔還是單個(gè),或者是包裝連接處的裂縫。
4)微生物挑戰法(浸入或氣溶膠挑戰)
Microbial immersion or aerosol challenge
這是一種概率性的泄漏測試方法,此檢查通常與模擬灌裝同時(shí)進(jìn)行。通過(guò)按照模擬灌裝驗證方案進(jìn)行培養基模擬灌裝,然后進(jìn)行壓塞軋蓋后,目檢合格,經(jīng)已驗證的滅菌柜滅菌后,將容器密封面浸入到高濃度的菌液中,使樣品容器內的培養基充分接觸封口內表面,樣品的頸部及封口的外表面應*浸泡在菌懸液中,浸泡一定時(shí)間后取出,定期培養后檢查是否有微生物侵入,以確定容器密封系統的完整性。同時(shí),需要做陽(yáng)性對照試驗,確認培養基的促生長(cháng)能力。測試中通常會(huì )運用真空或過(guò)壓的挑戰條件。
該方法的優(yōu)點(diǎn):
- 數十年來(lái)獲得廣泛應用。
- 是整個(gè)行業(yè)和法規熟識的做法。
- 可以與模擬灌裝結合,同步進(jìn)行。
- 對產(chǎn)品特性的直接評價(jià)(即,確保容器密封性可以使產(chǎn)品免受微生物污染)。
該方法的缺點(diǎn):
- 對樣品的破壞性。
- 只有通過(guò)或失敗的結果,沒(méi)有定量測試。
- 不可能進(jìn)行100%的樣本測試。
- 測試會(huì )耗時(shí)數周。
- 需要比較多的勞動(dòng)力。
- 只能適用于可以做培養基罐裝的包裝系統。
- 可能會(huì )導致假陽(yáng)性或假陰性的結果;測試的靈敏度部分依賴(lài)于分析員的操作技巧。
- 對于微小瑕疵,測試具有隨機性。
- 不同國家地區,對于培養基,所用菌種和測試方法還沒(méi)有統一。
該方法的應用范圍和建議:
- 此方法的檢測限隨著(zhù)以下因素波動(dòng):泄漏的大小,包裝材料,菌種,培養基和挑戰條件。
- 一直被用來(lái)建立關(guān)鍵的泄漏點(diǎn)(根據其泄漏的速率或大?。?。
- 浸入法比氣溶膠挑戰法更普遍,方法條件更容易達到,有更好的重復性。
- 不使用真空或過(guò)壓的條件,自然放置幾周時(shí)間再檢查,更具有代表性,不過(guò)耗時(shí)。
- 如果使用真空或過(guò)壓的條件,可以加速測試,數小時(shí)內就可以做檢查,這種方式可以代表運輸條件,減少測試時(shí)間。
5)染色浴法
Dye ingress
這是一種概率性的泄漏測試方法。將密封容器*浸沒(méi)在染色浴中,也可在染色浴中加入表面活性劑,對整個(gè)測試腔體進(jìn)行抽真空。如果該容器有裂縫,空氣就會(huì )從瓶中溢出。然后解除真空,這時(shí)泄漏容器內存在負壓,染色溶液會(huì )從裂縫中進(jìn)入瓶?jì)炔?,再對測試腔體加正壓,提高染色液的滲入性,通過(guò)分析員或儀器目檢剔除變色的容器。
該方法的優(yōu)點(diǎn):
- 數十年來(lái)獲得廣泛應用。
- 有ASTM和ISO的標準方法。
- 是整個(gè)行業(yè)和法規熟識的做法。
- 基礎并且有效率。
- 可靈活應用,同時(shí)測試不同包裝容器的泄漏情況。
- 可以看出泄漏的位置。
- 泄漏位置可以在液相中。
該方法的缺點(diǎn):
- 對樣品的破壞性。
- 只有通過(guò)或失敗的結果,沒(méi)有定量測試。
- 不可能進(jìn)行100%的樣本測試。
- 必須是透明的包裝系統,用于目測判斷。
- 如果樣品體積本身比較大,只進(jìn)入很少的染色水,有時(shí)不容易分辨出來(lái)。
- 對于微小瑕疵,測試具有隨機性。
該方法的應用范圍和建議:
- 方法具有多用途,可以測試初級包裝和外包裝,用來(lái)支持產(chǎn)品開(kāi)發(fā)階段,商業(yè)化生產(chǎn),和穩定性研究階段的檢漏測試。
- 直接檢測相關(guān)泄露
- 可以運用不同的染色劑。
- 如果運用優(yōu)化的真空/加壓循環(huán)工藝,可以提高測試的靈敏度。方法的檢測限隨著(zhù)以下因素波動(dòng):泄漏的大小,包裝材料,染色液的濃度,和挑戰條件。
- 染色液必須是易混合的而且不和產(chǎn)品發(fā)生化學(xué)反應。
- 可以把同樣的挑戰條件應用到微生物侵入試驗法中。
- 對于液體制劑應用良好,但基于染色液的限制,可能對凍干制劑不適合 。
人工穿孔的技術(shù)討論
上述討論的檢漏方法,都需要做方法驗證,需要有明確泄漏的樣本來(lái)做陽(yáng)性控制,以挑戰方法的檢漏能力。對于樣品的人工穿孔,有以下幾個(gè)常用的方法:
- 鐳射穿孔,直接穿透包裝容器本身
- 鐳射穿孔,穿透在和包裝容器相連的金屬片或管 (laser drilling into a metal plate or tubing that is integrated to a CCS )
- 微米級的金屬絲插入到容器中
- 微量吸管插入到膠塞或連接到容器的一個(gè)人工小孔上
- 毛細管(熔融硅,鎳或玻璃)插入到膠塞或連接到容器的一個(gè)人工小孔上。
每一種方法都有其挑戰性,包括穿孔尺寸的限制,穿孔形狀不規則,穿孔大小難以測量,微小穿孔容易被立即堵上,造價(jià)高等等。目前行業(yè)內沒(méi)有標準來(lái)規定穿孔技術(shù)和孔徑測試的方法。在建立容器密封性測試方法的時(shí)候,每個(gè)公司需要對自己建立的方法做合理性的說(shuō)明,采用適當的方法。
結論
隨著(zhù)修訂版USP<1207>的執行,對于包裝容器密封性測試(CCIT)會(huì )有更多深入的調查,生產(chǎn)無(wú)菌制劑的企業(yè)需要符合不斷發(fā)展的法規期望。對于CCIT的測試方法和可接受標準,目前行業(yè)給予企業(yè)一定的靈活性。正如上述討論,每個(gè)方法都有其優(yōu)缺點(diǎn)和適用性,市面上的測試儀器也有其各自的優(yōu)缺點(diǎn),因此,制藥企業(yè)有責任根據產(chǎn)品自身的特點(diǎn)和產(chǎn)品的不同發(fā)展階段,采用風(fēng)險評估的方法,選取并驗證合適的檢漏測試方法,并建立泄漏的可接受標準。
表1. 五種泄露檢測法綜合評價(jià)
表2. 五種泄露檢測法詳細描述